ZetaView F-NTA助力冠狀病毒的滴度檢測(cè)

2024-12-27

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應(yīng)用領(lǐng)域外泌體
樣品ZetaView F-NTA助力冠狀病毒的滴度檢測(cè)
項(xiàng)目ZetaView F-NTA助力冠狀病毒的滴度檢測(cè)
參考標(biāo)準(zhǔn)/文獻(xiàn)https://www.dksh-instrument.cn/Solution/615

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Particle Metrix(PMX） ZetaView? 納米顆粒追蹤分析儀

品牌PMX

產(chǎn)地德國(guó)

型號(hào)ZetaView?

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摘要

有效檢測(cè)病毒滴度是病毒研究與診斷中非常關(guān)鍵的工作。目前，較為常用的病毒滴度檢測(cè)方法主要包括qPCR法、TCID50法、PFU法。但這些檢測(cè)方法操作繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，對(duì)操作者有較高的技術(shù)要求。因此，一種快速、可靠的病毒滴度檢測(cè)方法無(wú)疑會(huì)極大地簡(jiǎn)化研究人員的病毒定量工作。

基于熒光標(biāo)記和納米顆粒跟蹤分析技術(shù)的新方法F-NTA（fluorescence-based Nanoparticle Tracking Analysis）法，既可以通過(guò)熒光信號(hào)特異性地識(shí)別病毒顆粒，又可以借助NTA技術(shù)簡(jiǎn)單可靠的實(shí)驗(yàn)操作來(lái)快速實(shí)現(xiàn)病毒顆粒的定量檢測(cè)，這為病毒研究領(lǐng)域的研究人員提供了一個(gè)新穎的病毒定量檢測(cè)方法。

本文以熱滅活的野生型冠狀病毒（SARS-CoV-2 B.1，如圖1）和δ突變型冠狀病毒為例，演示了通過(guò)F-NTA方法快速完成病毒定量的過(guò)程。文中所有實(shí)驗(yàn)均在生物安全等級(jí)2級(jí)（BSL-2）的實(shí)驗(yàn)室條件下完成。

圖1：野生型冠狀病毒SARS-CoV-2 B.1的電鏡圖片

圖2：冠狀病毒的結(jié)構(gòu)

冠狀病毒表面有刺突蛋白（如圖2），可以通過(guò)Alexa Fluor^TM 488對(duì)刺突蛋白進(jìn)行抗體熒光標(biāo)記。抗體熒光標(biāo)記完成后，通過(guò)ZetaView^? PMX-420 QUATT分別在散射光模式和熒光模式下對(duì)野生型冠狀病毒和δ突變型冠狀病毒進(jìn)行NTA檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖3所示：野生型冠狀病毒在散射光模式下測(cè)得的粒徑值（X50）是118.6nm，濃度是4.5*10⁹個(gè)/ml，在熒光模式下測(cè)得的粒徑值（X50）是115.7nm，濃度是5.3*10⁸個(gè)/ml；δ突變型冠狀病毒在散射光模式下測(cè)得的粒徑值（X50）是119.1nm，濃度是1.2*10⁹個(gè)/ml，在熒光模式下測(cè)得的粒徑值（X50）是125.5nm，濃度是1.6*10⁸個(gè)/ml。

圖3：野生型冠狀病毒（上）和δ突變型冠狀病毒（下）分別在ZetaView散射光模式（灰色）和熒光模式（紅）下的檢測(cè)結(jié)果

由此結(jié)果可以看出，表面帶有刺突蛋白的真實(shí)病毒顆在所有顆粒中的占比并不是很高，樣品中存在大量類似的干擾顆粒。即便如此，通過(guò)F-NTA的方法也可以從眾多顆粒中直接、快速地檢測(cè)到真實(shí)的病毒顆粒信息。相比于傳統(tǒng)的病毒定量方法，F(xiàn)-NTA方法操作簡(jiǎn)單方便，數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更好，在實(shí)際研究中的應(yīng)用也將會(huì)越來(lái)越廣泛。

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